樣本因素對ELISA技術(shù)的質(zhì)量影響
標(biāo)本干擾因素包括內(nèi)源性干擾因素和外源性干擾因素，前者包括類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、異嗜性抗體、自身抗體、等，后者包括標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本貯存時間過長、標(biāo)本凝固不全、冷凍標(biāo)本的反復(fù)凍融等。其中外源性干擾因素是我們在檢測過程中可以避免也是必須避免的因素，而避免內(nèi)源性因素的干擾則主要通過選擇合適的試劑盒。在臨床中遇到少見的疑難病例時應(yīng)當(dāng)考慮到內(nèi)源性干擾因素的存在。以下對外源性干擾因素進(jìn)行簡要說明：
1.標(biāo)本溶血 要注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán)，其具有類過氧化物的活性，因此，在以辣根過氧化物酶（horseradish peroxidase,HRP）為標(biāo)記酶的ELISA測定中，如果血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高，則其就很容易在溫育過程中吸附于固相，ELISA試劑盒從而與后面加入的底物反應(yīng)顯色。
2.標(biāo)本凝固不全 血液通常在采集后半小時后開始凝固，18～24h*凝固。如果在血液未凝固時即離心分離血清，則可因纖維蛋白原非特異吸附于微孔而造成假陽性結(jié)果。為了縮短標(biāo)本處理時間，可以在離心前將血液標(biāo)本置于溫箱中溫育或者采用帶分離膠的或于中加入適當(dāng)?shù)拇倌齽┮约铀傺宓姆蛛x。
3.標(biāo)本被細(xì)菌污染 標(biāo)本的采集及血清分離要注意盡量避免細(xì)菌污染。細(xì)菌菌體中除可能含有內(nèi)源酶對測定產(chǎn)生非特異性干擾外，還可能對抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用。另外標(biāo)本在保存中出現(xiàn)渾濁或絮狀物時，應(yīng)離心沉淀后取上清檢測。
4.標(biāo)本貯存時間過長 標(biāo)本在低溫下保存時間過長，ELISA試劑盒IgG可聚合成多聚體，在間接法ELISA測定中會導(dǎo)致本底加深、甚至出現(xiàn)假陽性結(jié)果。通常情況下血清標(biāo)本可在2～8℃下保存l周，冷凍保存時間會更長，但對于抗體或抗原含量低的標(biāo)本而言，則可能會因抗體掉價、抗原分解而出現(xiàn)假陰性結(jié)果。
5.冷凍保存標(biāo)本避免反復(fù)凍融ELISA試劑盒 標(biāo)本的反復(fù)凍融會因其所產(chǎn)生的機(jī)械剪切力對標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用，使抗體效價跌落從而引起假陰性結(jié)果，所以測抗體的血清標(biāo)本如需保存作多次檢測，宜少量分裝凍存。此外，標(biāo)本在凍存時會因蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，因此重新融解的標(biāo)本必須混勻，但不要進(jìn)行劇烈振蕩，反復(fù)顛倒即可。
